Четверг, 28 марта

Механическое разрушение

У молодых особей она гомогенна и компактна, а у старых, наоборот, характеризуется наличием большого количества гранул, полостей и вакуолей. Гранулы представлены в основном рибосомами, которые находятся в цитоплазме в свободном состоянии. В цитоплазме встречаются также полиметофосфатные (волютиновые) гранулы, являющиеся источником энергетических и питательных ресурсов клетки.

В цитоплазме микобактерии имеются жировые липогранулы (в основном на концах клетки). Ядро микобактерии представлено хроматиновыми структурами, расположенными в виде тяжей, гранул конгломератов.

Ядро не имеет ограничительной оболочки, а отделяется от цитоплазмы фазовыми мембранами. Для механического разрушения микобактерии используют ультразвук, различные прессы с узкими отверстиями, дезинтеграторы типа фракцио-натора Ribi, типа Mikl, шаровую мельницу и др. Нами был отработан режим разрушения микобактерии с помощью шаровой мельницы и дезинтегратора Mikl.

В шаровой мельнице, сконструированной по типу, описанному А. И. Тогуновой (1964), 10 г полувлажной массы микобактерии разрушалось за 20-24 ч 2 кг стальных шариков диаметром 7 мм. Целые микобактерии в таком гомогенате практически отсутствовали.

Для микроскопического контроля использовали дифференциальное окрашивание на живые и мертвые микобактерии по Murohashi, Yoshida.

Однако подобный метод разрушения оказался пригодным в основном для получения фракции цитоплазмы.

Для выделения фрагментов оболочек клеток нами был разработан метод разрушения микобактерии в дезинтеграторе Mikl, где с большой скоростью вибрируют стеклянные; разрушение микобактерии достигалось в течение при 4°С. После отделения фрагментов клеточных оболочек и тщательного их отмывания получали чистую фракцию оболочек микобактерии, которую наиболее целесообразно называть фракцией клеточных оболочек, так как клеточные стенки выделяются при данном режиме совместно с прилегающей цитоплазматической мембраной.